Окраска ГОФП-методом (по Ли) — Практика гистолога

Обработка теоретического материала по данной окраске проводилась совместно с судебно-медицинским экспертом Ю.В. Григорьевой.

Статья по данной теме опубликована в сборнике научных трудов «Вопросы судебной медицины, медицинского права и биоэтики» под редакцией А.П.Ардашкина, В.В.Сергеева в 2007 году (с. 63-65).

Название метода окраски по ГОФП произошло от первых букв используемых красителей: гематоксилин — основной фуксин — пикриновая кислота. Под названием «фуксиноррагический метод» он был описан Liе и соавторами в 1971 году. В том же году Bouchardy B. и Маjno G. предложили диагностировать ранние повреждения по так называемой «волнистости миокарда». В последующем работами Hoch — Ligeti C., Lan C.W. и Pesonen E. была доказана применимость обоих методов для обнаружения повреждений миокарда в секционном материале [1, 3, 4, 5, 6].

Сущность данного метода заключается в окрашивании основным фуксином саркоплазмы ишемизированных кардиомиоцитов в красно — коричневый цвет, в отличие от интактных желто-коричневого или бледно-зеленого цветов. При небольшом промежутке времени от начала кислородного голодания миокарда очаги ишемического «повреждения» будут мелкими, затем сливающимися друг с другом, с течением времени и нарастанием ишемии миокарда — средней величины, крупными и обширными очагами фуксинофильной дегенерации миокарда.

В опубликованных работах показана эффективность ГОФП-метода для объективного выявления ишемических, как коронарогенного, так и некоронарогенного происхождения повреждений миокарда, а также возможность выявления фибрина и соединительнотканных структур (рубцовая ткань окрашивается в серо-сиреневый цвет, эластические волокна — в ярко-красный цвет). Эритроциты в большинстве наблюдений выглядят ярко-красными.

В руководстве «Гистологическая и микроскопическая техника» [2] указывается на возможность выявления ГОФП-методом фуксинофильной дегенерации миокарда (морфологическое проявление наиболее ранних изменений в сердечной мышце). Сущность данных изменений заключается в том, что в поражённых кардиомиоцитах появляется фуксинофильный субстрат (вначале вблизи ядра, затем по всей цитоплазме и распространяется на большую часть мышечного волокна). Отмечено, что данные изменения наблюдается лишь на начальных стадиях поражения миокарда, а когда мышечные волокна начинают дезинтегрироваться и рассасываться, фуксинофильный субстрат полностью исчезает. Авторами указано, что ГОФП — методом подкрашиваются кардиомиоциты, имеющие контрактурные повреждения и находящиеся в пересокращенном состоянии.

Целью работы ряда экспертов гистологического отделения Самарского ОБСМЭ (Т.Н.Разматова, Е.И.Филиппенкова, Ю.В.Григорьева, С.В.Ким, Е.А.Егорова, 2004-2006гг.) явились обобщение результатов применения окраски срезов миокарда ГОФП — методом и оценка его диагностических возможностей в судебно-медицинской практике В основу обобщения положена экспертная практика применения данного метода. Всего за период 1993-2006г.г. этот метод применялся более чем в 13.000 случаев гистологических исследований в целях выявления очагов острого ишемического и метаболического «повреждения» кардиомиоцитов.

Секционный материал фиксировался в кислом 10% — ном растворе формалина. Кусочки миокарда заливали в парафин. Полученные срезы толщиной 5-10 мкм окрашивали гематоксилином — эозином и ГОФП-методом.

Приводим методику окраски ГОФП-методом по Lie с соавторами [1, 3].

РАСТВОР А: алюмо-аммонийных квасцов 6г, гематоксилина 0,5г, жёлтой окиси ртути 0,25г, дистиллированной воды 70мл. Раствор кипятить 10 мин, охладить, добавить 30мл глицерина и 4мл ледяной уксусной кислоты.

РАСТВОР В: 0,1% раствор основного фуксина в дистиллированной воде.

РАСТВОР С: 0,1% раствор пикриновой кислоты в абсолютном ацетоне.

Все манипуляции проводятся при комнатной температуре. Раствор С и все промывные жидкости меняются после каждых 5-6 срезов.

Процедура окрашивания:

1. Депарафинирование, доведение до дистиллированной воды
2. Окрашивание раствором А	10с
3. Промывание в проточной воде	5мин
4. Окраска раствором В	3 мин
5.Ополаскивание в дистиллированной воде	5-10с
6. Ополаскивание в абсолютной ацетоне	5-10с
7. Раствор С	20с
8. Быстрое ополаскивание в абсолютном ацетоне	5-10с
9. Просветление в ксилоле и заключение в канадский бальзам

Результаты практического применения ГОФП — метода окраски позволили подтвердить и выявить следующие её особенности:

1. На ранних стадиях (до развития некроза) ишемического «повреждения» миокарда различного генеза, появившийся фуксинофильный субстрат в цитоплазме кардиомиоцитов окрашивается в красный цвет различных оттенков на фоне желто — зеленоватого или желто — коричневатого интактного миокарда.

2. ГОФП — методом «подкрашиваются» кардиомиоциты, имеющие контрактурные повреждения (при этом данные участки контрактур кардиомиоцитов имеют вид мелких очагов фуксинофилии, соседние участки релаксации кардиомиоцитов будут бледно — зелеными), что позволяет гистологически выявлять диагностически важные контрактуры кардиомиоцитов при ушибах сердца, воздействии на рефлексогенные зоны без проведения поляризационной микроскопии.

З. Результаты окраски по ГОФП миокарда в состоянии некроза являются недостоверными, так как при некрозе кардиомиоцитов фуксинофильный субстрат исчезает, наиболее вероятна ложноотрицательная окраска.

4. Окраска миокарда с аутолитическими и гнилостными изменениями часто дает ложноположительный результат, что, по нашему мнению, обусловлено изменением биохимического состава кардиомиоцитов.

5. Данным методом кроме очагов острого ишемического «повреждения» миокарда выявляются фибрин, рубцовая ткань и эластические волокна, что дает возможность проводить комплексную оценку состояния сердечной мышцы.

Наш опыт подтверждает простоту, доступность и эффективность ГОФП — метода окраски препаратов миокарда. Это позволяет рекомендовать его, но с вышеуказанными ограничениями, для применения в судебно-гистологической практике в целях выявления и доказательства ранних ишемических повреждений миокарда, а также для комплексной оценки состояния сердечной мышцы.

Примеры микропрепаратов, окрашенных ГОФП-методом (по Ли), с различной степенью выраженности фуксинофилии цитоплазмы кардиомиоцитов, фуксинофильной дегенерации миокарда.


Рис. 1, 2. Умеренное количество диффузно расположенных мелких очагов умеренной фуксинофилии цитоплазмы кардиомиоцитов в виде небольших участков кардиомиоцитов (преимущественно в области их ядер), окрашенных в красный цвет на жёлто-зелёном фоне. Мелкоочаговая волнообразная деформация мышечных волокон миокарда (рис. 1). Окраска: ГОФП-метод. Увеличение х250.

Рис. 3, 4. Субтотальная и тотальная выраженная фуксинофилия сохранившихся кардиомиоцитов, большая их часть в состоянии умеренной гипертрофии. Единичные мышечные волокна истончены за счёт атрофии. Очагово-диффузный интрамуральный кардиосклероз. Окраска: ГОФП-метод. Увеличение х250.

Рис. 5-8. На всей площади срезов обилие сливающихся друг с другом густо расположенных мелких очагов умеренной-выраженной фуксинофилии цитоплазмы кардиомиоцитов в виде небольших их участков, окрашенных в красный цвет на жёлто-зелёном фоне. Окраска: ГОФП-метод. Увеличение х250.



Рис. 9, 10. Группы переполненных ярко-красной кровью сосудов миокарда. Тотальная выраженная фуксинофилия сохранившихся кардиомиоцитов, распространённая выраженная фуксинофильная дегенерация миокарда. Картина инфаркта миокарда в стадии рубцевания (организации): крупные участки миокарда замещены разрастающейся «созревающей» рыхлой неоформленной соединительной тканью со слабо-умеренной пролиферацией фибробластов, диффузно расположенными гемосидерофагами, тонкостенными новообразованными полнокровными сосудами. Окраска: ГОФП-метод. Увеличение х100 и х250.

Рис. 11. Тотальная выраженная фуксинофилия цитоплазмы кардиомиоцитов с распространенной фуксинофильной дегенерацией миокарда. Умеренная-выраженная гипертрофия кардиомиоцитов. Слабо-умеренный периваскулярный кардиосклероз. Окраска: ГОФП-метод. Увеличение х250.	Рис. 12. Граница крупного очага выраженной фуксинофильной дегенерации миокарда в виде крупного участка миокарда, окрашенного в красный цвет на жёлто-зелёном фоне. Окраска: ГОФП-метод. Увеличение х100.

Рис. 13-16. На всей площади срезов обилие сливающихся друг с другом густо расположенных мелких очагов умеренной-выраженной фуксинофилии цитоплазмы кардиомиоцитов в виде небольших их участков, окрашенных в красный цвет на жёлто-зелёном фоне. Выраженная картина очагово-диффузного полиморфноклеточного миокардита с преобладанием продуктивного компонента воспаления. Слабый и слабо-умеренный сетчатый склероз. Неравномерно выраженный отёк межмышечной стромы. Окраска: ГОФП-метод. Увеличение х250.



Рис. 17, 18. Картина очагового острого гнойного межуточного миокардита (очаговая инфильтрация стромы миокарда сегментоядерными нейтрофильными лейкоцитами). В просветах ряда сосудов бактериальные эмболы. Множественные густо расположенные, сливающиеся друг с другом мелкие очаги выраженной фуксинофилии цитоплазмы в виде небольших их участков, окрашенных в красный цвет на жёлто-зелёном фоне, формирующих распространённую фуксинофилию миокарда. Окраска: ГОФП-метод. Увеличение х250.

Рис. 19. Тотальная выраженная фуксинофилия цитоплазмы кардиомиоцитов. Начальный склероз сосудистой стенки. Слабо выраженный периваскулярный кардиосклероз. Очаговый периваскулярный липоматоз. Окраска: ГОФП-метод. Увеличение х250.	Рис. 20. На фоне интактного миокарда (кардиомиоциты окрашены в жёлто-зелёный цвет) мелкоочаговый интрамуральный кардиосклероз с крупной группой кучно, густо расположенных мелких новообразованных сосудов, заполненных ярко-красной кровью. Окраска: ГОФП-метод. Увеличение х250.


Рис. 21-24. Тотальная выраженная фуксинофилия цитоплазмы сохранившихся кардиомиоцитов в виде красного их окрашивания на жёлтом фоне, выраженная очагово-диффузная фуксинофильная дегенерация миокарда. Выраженный очагово-диффузный интрамуральный кардиосклероз. Очаговая фрагментация мышечных волокон миокарда (как признак возможного нарушения ритма сердца). Окраска: ГОФП-метод. Увеличение х100.



Рис. 25. Обилие сливающихся друг с другом густо расположенных мелких очагов умеренной-выраженной фуксинофилии цитоплазмы кардиомиоцитов в виде небольших их участков, окрашенных в красный цвет на жёлто-зелёном фоне. Мелкоочаговый кардиосклероз в виде участка разрастания соединительной ткани бледно-сиреневого цвета. Окраска: ГОФП-метод. Увеличение х250.	Рис. 26. Слабо выраженный субэндокардиальный склероз (под эндокардом тонкая полоска красноватого окрашивания на жёлто-зелёном фоне). Кардиомиоциты представлены поперечным сечением, с признаками умеренной-выраженной их гипертрофии. Окраска: ГОФП-метод. Увеличение х250.

Рис. 27-30. На фоне преобладания выраженной фуксинофилии (красного окрашивания) цитоплазмы кардиомиоцитов очаги распада фуксинофильного субстрата в зонах некробиоза-некроза кардиомиоцитов (бесструктурные участки малинового-розового цвета). Окраска: ГОФП-метод. Увеличение х250.



Рис. 31, 32. Труп мужчины 24 лет. Сосуд в субэпикардиальной жировой ткани с выраженной картиной полиморфноклеточного эндоваскулита с развитием выраженного сужения просвета сосуда (вплоть до щелевидного). Слабо выраженный склероз самой сосудистой стенки. Периваскулярно — циркулярное полиморфноклеточное воспаление с преобладанием продуктивного компонента. Окраска: ГОФП-метод. Увеличение х100 и х250.


		Рис. 33-35. В субэпикардиальной жировой ткани крупный сосуд со слабо выраженным склерозом стенки, с наличием обтурирующего внутрипросветного тромба с признаками организации и реваскуляризации. Окраска: ГОФП-метод. Увеличение х100 и х250.

		Рис. 36. Немногочисленные мелкие очаги умеренной-выраженной фуксинофилии цитоплазмы кардиомиоцитов в виде небольших их участков, окрашенных в красный цвет на жёлтом фоне. Слабо-умеренный сетчатый кардиосклероз. Признаки дистрофии миокарда в виде сочетания в срезах кардиомиоцитов в состоянии гипертрофии и атрофии, наличия мелких очагов круглоклеточной инфильтрации стромы. Окраска: ГОФП-метод. Увеличение х250.

Примеры описания микропрепаратов миокарда, окрашенных

ГОФП-методом:

Пример№1.

СЕРДЦЕ (ГОФП-метод, 2объекта, оценка наличия очагов острого ишемического, метаболического «повреждения» миокарда) — в отдельных полях зрения немногочисленные мелкие очаги слабой и умеренной фуксинофилии цитоплазмы кардиомиоцитов в виде мелких их фрагментов, окрашенных в кирпично-красный цвет на бледно-зелёном фоне интактного миокарда.

Пример№2.

СЕРДЦЕ (ГОФП-метод, 2объекта, оценка наличия очагов острого ишемического, метаболического «повреждения» миокарда) — на большей площади срезов умеренное количество диффузно расположенных, на отдельных участках срезов сливающихся друг с другом густо расположенных мелких очагов умеренной-выраженной фуксинофилии цитоплазмы кардиомиоцитов в виде небольших их участков, окрашенных в красный цвет на жёлто-зелёном фоне.

Пример№3.

Пример№4.

СЕРДЦЕ (ГОФП-метод, 3объекта, оценка наличия очагов острого ишемического, метаболического «повреждения» миокарда) — на всей площади срезов обилие сливающихся друг с другом густо расположенных мелких очагов выраженной фуксинофилии цитоплазмы кардиомиоцитов в виде небольших их участков, окрашенных в красный цвет на жёлто-зелёном фоне, сформировавших крупноочаговую и распространенную фуксинофильную дегенерацию миокарда.

Пример№5.

СЕРДЦЕ (ГОФП-метод, 4объекта, оценка наличия очагов острого ишемического, метаболического «повреждения» миокарда) — на всей площади срезов обилие сливающихся друг с другом густо расположенных мелких очагов выраженной фуксинофилии цитоплазмы кардиомиоцитов в виде небольших их участков, окрашенных в красный цвет на жёлто-зелёном фоне, сформировавших распространенную фуксинофильную дегенерацию миокарда. В отдельных полях зрения на фоне фуксинофильной дегенерации миокарда группы кардиомиоцитов окрашены в розовый и розово-малиновых цвет (распад фуксинофильного субстрата с группах кардиомиоцитов, находящихся в состоянии некробиоза-некроза).

Литература:

1. Серов Р.А., Чекарева Г.А., Рагузин К.К., Шмырева Т.А. Применение окраски ГОФП — методом для выявления повреждений миокарда различного генеза // Архив патологии. — 1977. — т. 34. — в. 5. — С. 70-72.

2. Сапожников А.Г. , Доросевич А.Е. Гистологическая и микроскопическая техника // Смоленск. — 2000. — С. 151 — 153.

3. Lie J.T., Holley K.F., Kampa W.R.. et a. — «Proc. Mayo Clin.», 1971, v. 46, p. 319.

4. Bouchardy B., Маjno G. — «Cardiology», 1971/1972, v. 56, p. 327.

5. Hoch — Ligeti C., Lan C.W. — «Am. J. clin. Path.», 1974, v. 62, p. 455.

6. Pesonen E. «Acta path. Microbiol. Scand.», Sect. «A», 1974, v. 82, p. 648.

Похожие записи:

Администратор