Окраска по Лепене

Окраска гемоглобиновых пигментов трупных пятен и кровоизлияний по Лепене

в аутолитически и гнилостно изменённых тканях.

Лепене способ (G. Lepchne, род. в 1887 г., нем. врач) — метод обнаружения гемоглобина в тканях, основанный на выявлении его пероксидазной активности путем помещения замороженных срезов в смесь раствора бензидина и перекиси водорода; эритроциты и гемоглобин окрашиваются в темно-коричневый цвет.

1.     Депарафинированные срезы на 1 час в смеси Лепене (3мл раствора бензидина + 3 капли пергидроля)

2.     Промыть дистиллированной водой 5-10 минут

3.     Докрасить ядра гематоксилином 6 минут

4.     Промыть дистиллированной водой 5-10 минут

5.     Промыть в спирте 96% 30 минут, ксилолах, заключить.

Реактив:

  • 2 мл 0,6% раствор бензидина (в 10 мл 96% этанола растворить 10мг сухого бензидина, профильтровать)
  • 3 капли пергидроля
  • 4,5 мл 70 (96) % этилового спирта

 

Рекомендуется окрашивание замороженных срезов.

На практике гемоглобиновый пигмент красится в жёлто-коричневый, буро-коричневый, жёлто-зелёный цвета на бледно-серо-голубом и бледно-бежевом фоне.

Обнаружение крупных и распространённых очагов отложения гемоглобинового пигмента в наиболее вероятной форме свидетельствует о прижизненном образовании повреждений. При наличии мелких очагов отложения гемоглобинового пигмента, а также при выявлении геморрагического пропитывания тканей высказаться о прижизненном происхождении повреждений не представляется возможным.

При резко выраженных гнилостных изменениях тканей, обильной гнилостной бактериальной и грибковой микрофлоре может быть ложноотрицательная реакция по Лепене (отрицательная окраска при имевшем место кровоизлиянии).

 

Пример описания микропрепарата:

МЯГКИЕ ТКАНИ ИЗ МЕСТА ПЕРЕЛОМА VI ПРАВОГО РЕБРА ПО ППЛ (1объект, окраска по Лепене) — в срезах на фоне выраженного аутолиза представлены скелетная мышечная ткань с преобладанием волокон, окрашенных в буро-коричневый цвет (в состоянии геморрагического пропитывания), волокнистая соединительная ткань, жировая клетчатка в состоянии, сходном с отёком, часть представленных сосудов содержит небольшое количество крови, окрашенный в буро-коричневый цвет. Обнаружен крупный очаг буро-коричневой окраски тканей (очаг отложения гемоглобинового пигмента), в его зоне различимо до 15-17 лейкоцитов в поле зрения микроскопа.

 

Результаты окраски срезов мягких тканей по Лепене:

 

Рис. 1. Срез-контроль: интактная слюнная железа окрашена в серо-синий цвет. Эритроциты в просветах сосудов буро-коричневого цвета.

Окраска: по Лепене. Увеличение х250.

Рис. 2. Средней величины очаг отложения гемоглобинового пигмента в виде буро-коричневого окрашивания на серо-голубом фоне. Очаговое геморрагическое пропитывание групп скелетных мышечных волокон.

Окраска: по Лепене. Увеличение х250.

Рис. 4. В срезах тотальное буро-коричневое окрашивание скелетных мышечных волокон (их геморрагическое пропитывание). В межмышечных пространствах очень мелкие скопления буровато-жёлтых, рыхло расположенных эритроцитов, клеточная реакция не видна.

Окраска: по Лепене. Увеличение х250.

Рис. 5. В срезах представлены жировая клетчатка, фрагменты железистой ткани, заполненные буро-коричневыми эритроцитами небольшие сосуды. Крупноочаговое деструктивное кровоизлияние буро-коричневого цвета, с немногочисленными лейкоцитами.

Окраска: по Лепене. Увеличение х250.

Рис. 5. Фрагмент крупноочагового деструктивного кровоизлияния буро-красного цвета, различимо умеренное количество лейкоцитов.

Окраска: по Лепене. Увеличение х250.

Рис. 6. Субтотальное геморрагическое пропитывание скелетных мышечных волокон (окрашены в буро-коричневый цвет на серо-голубом фоне). В соединительной ткани различим очаговый умеренно выраженный лейкоцитоз.

Окраска: по Лепене. Увеличение х250.

Администратор