Окраска гемоглобиновых пигментов трупных пятен и кровоизлияний по Лепене
в аутолитически и гнилостно изменённых тканях.
Лепене способ (G. Lepchne, род. в 1887 г., нем. врач) — метод обнаружения гемоглобина в тканях, основанный на выявлении его пероксидазной активности путем помещения замороженных срезов в смесь раствора бензидина и перекиси водорода; эритроциты и гемоглобин окрашиваются в темно-коричневый цвет.
1. Депарафинированные срезы на 1 час в смеси Лепене (3мл раствора бензидина + 3 капли пергидроля)
2. Промыть дистиллированной водой 5-10 минут
3. Докрасить ядра гематоксилином 6 минут
4. Промыть дистиллированной водой 5-10 минут
5. Промыть в спирте 96% 30 минут, ксилолах, заключить.
Реактив:
- 2 мл 0,6% раствор бензидина (в 10 мл 96% этанола растворить 10мг сухого бензидина, профильтровать)
- 3 капли пергидроля
- 4,5 мл 70 (96) % этилового спирта
Рекомендуется окрашивание замороженных срезов.
На практике гемоглобиновый пигмент красится в жёлто-коричневый, буро-коричневый, жёлто-зелёный цвета на бледно-серо-голубом и бледно-бежевом фоне.
Обнаружение крупных и распространённых очагов отложения гемоглобинового пигмента в наиболее вероятной форме свидетельствует о прижизненном образовании повреждений. При наличии мелких очагов отложения гемоглобинового пигмента, а также при выявлении геморрагического пропитывания тканей высказаться о прижизненном происхождении повреждений не представляется возможным.
При резко выраженных гнилостных изменениях тканей, обильной гнилостной бактериальной и грибковой микрофлоре может быть ложноотрицательная реакция по Лепене (отрицательная окраска при имевшем место кровоизлиянии).
Пример описания микропрепарата:
МЯГКИЕ ТКАНИ ИЗ МЕСТА ПЕРЕЛОМА VI ПРАВОГО РЕБРА ПО ППЛ (1объект, окраска по Лепене) — в срезах на фоне выраженного аутолиза представлены скелетная мышечная ткань с преобладанием волокон, окрашенных в буро-коричневый цвет (в состоянии геморрагического пропитывания), волокнистая соединительная ткань, жировая клетчатка в состоянии, сходном с отёком, часть представленных сосудов содержит небольшое количество крови, окрашенный в буро-коричневый цвет. Обнаружен крупный очаг буро-коричневой окраски тканей (очаг отложения гемоглобинового пигмента), в его зоне различимо до 15-17 лейкоцитов в поле зрения микроскопа.
Результаты окраски срезов мягких тканей по Лепене:
Рис. 1. Срез-контроль: интактная слюнная железа окрашена в серо-синий цвет. Эритроциты в просветах сосудов буро-коричневого цвета. Окраска: по Лепене. Увеличение х250. |
Рис. 2. Средней величины очаг отложения гемоглобинового пигмента в виде буро-коричневого окрашивания на серо-голубом фоне. Очаговое геморрагическое пропитывание групп скелетных мышечных волокон. Окраска: по Лепене. Увеличение х250. |
Рис. 4. В срезах тотальное буро-коричневое окрашивание скелетных мышечных волокон (их геморрагическое пропитывание). В межмышечных пространствах очень мелкие скопления буровато-жёлтых, рыхло расположенных эритроцитов, клеточная реакция не видна. Окраска: по Лепене. Увеличение х250. |
Рис. 5. В срезах представлены жировая клетчатка, фрагменты железистой ткани, заполненные буро-коричневыми эритроцитами небольшие сосуды. Крупноочаговое деструктивное кровоизлияние буро-коричневого цвета, с немногочисленными лейкоцитами. Окраска: по Лепене. Увеличение х250. |
Рис. 5. Фрагмент крупноочагового деструктивного кровоизлияния буро-красного цвета, различимо умеренное количество лейкоцитов. Окраска: по Лепене. Увеличение х250. |
Рис. 6. Субтотальное геморрагическое пропитывание скелетных мышечных волокон (окрашены в буро-коричневый цвет на серо-голубом фоне). В соединительной ткани различим очаговый умеренно выраженный лейкоцитоз. Окраска: по Лепене. Увеличение х250. |