ОКРАСКА ГЕМАТОКСИЛИНОМ — ЭОЗИНОМ
Окраска гематоксилин-эозином — наиболее распространённый метод окрашивания срезов. Этот методпозволяет установить отношения между частями органа, отлично выявляя все клеточные элементы и некоторые неклеточные структуры. Практически во всех случаях независимо от поставленной задачи применяется окраска гематоксилин-эозином. В большинстве случаев для изучения структуры нормального или измененного в результате болезни органа ограничиваются этим методом окраски. В других случаях, когда перед исследователем стоит специальная задача, пользуются особыми методами, окрашивая в то же время параллельно ряд срезов гематоксилин-эозином.
Эта окраска является двойной: гематоксилин — основной краситель — окрашивает ядра клеток, эозин — кислый краситель — красит протоплазму клеток и в меньшей степени — различные неклеточные структуры.
Гематоксилин представляет собой экстракт древесины кампешевого дерева, произрастающего в Америке. Эозин — искусственная краска. Растворы красителей должны быть приготовлены заранее. Гематоксилин сам по себе не является красящим веществом. Для того чтобы приготовить краску, гематоксилин подвергают окислению, в результате чего он превращается в красящее вещество — гематеин. В соединении с некоторыми солями гематеин дает четкое окрашивание ядер (используют гематоксилин Эрлиха, Майера, железный гематоксилин Гейденгайна).
Эозин — протоплазматический краситель; используется он в виде спиртовых или, гораздо чаще, водных растворов. Для приготовления эозина 0,1 г краски растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Подготовка срезов к окраске заключается в их кратковременной обработке спиртом. Поскольку при заливке в парафин или целлоидин материал обезвоживается в спиртах, срезы, полученные при этих способах заливки, в особой подготовке для окраски гематоксилин-эозином не нуждаются. Обрабатывать необходимо замороженные срезы. При этом происходит их обезжиривание и другие изменения в структуре, что значительно улучшает окрашивание гематоксилин-эозином. Срезы обрабатывают в 96° спирте не более 3-5 минут. Из спирта срезы переносят обратно в дистиллированную воду. Окраску производят сначала гематоксилином.
Порядок проведения окраски:
Дистиллированная вода | ополоснуть |
Раствор гематоксилина | 1-20 мин |
Солянокислый спирт | дифференцировка |
Аммиачная вода | срезы синеют (контроль под микроскопом) |
Проточная вода | 5-10 мин |
Дистиллированная вода | ополоснуть |
Раствор эозина | 10с-3 мин |
Спирт 96%, карбол-ксилол, заключение |
Результат: ядра синие, цитоплазма и межклеточное вещество розовые.
Примеры практических микропрепаратов, окрашенных гематоксилином-эозином:
Рис. 1, 2. Болезнь Фара (феррокальциноз). В веществе головного мозга из зоны подкорковых ядер зональное обызвествление (практически без признаков склероза) стенок небольших сосудов (капилляров, мелких артерий и артериол) различной степени выраженности (от пылевидного включения солей кальция в толще стенки до полного замещения сосудистых стенок кальцинатами). Вдоль стенок большинства капилляров густо расположены небольшие округло-овальные кальцинаты по типу псаммом, вокруг отдельных капилляров образованы целые муфты петрификатов. Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х100 и х250. |
|||||
Рис. 3, 4. Болезнь Фара (феррокальциноз, другое наблюдение). Крупные группы густо расположенных мелких сосудов с наличием циркулярного пылевидного и в виде мелких гранул кальциноза стенок, расположенного между адвентицией сосудов и средней их оболочкой, в толще средней оболочки, полностью замещающего сосудистую стенку. Видны фрагменты сосудистых стенок в косопоперечном, продольном срезе, утолщенные кальцифицированные стенки выглядят как «кусочки вермишели». Окраска: гематоксилин-эозин. Увеличение х250. |
|||||
Рис. 5. Очаговый интрамуральный кардиосклероз. Сохранившиеся кардиомиоциты в состоянии выраженной белковой зернистой дистрофии, выраженной гипертрофии. Окраска: гематоксилин-эозин. Увеличение х250. |
Рис. 6. Умеренная-выраженная гипертрофия кардиомиоцитов, белковая зернистая их дистрофия. В цитоплазме ряда кардиомиоцитов вокруг ядер расположены мелкие скопления золотисто-жёлтого «пигмента старения» липофусцина. Очаговая круглоклеточная инфильтрация стромы. Окраска: гематоксилин-эозин. Увеличение х250. |
||||
Рис. 7, 8. Грибковый перикардит (острый гнойно-фибринозный), группа гиалогифомикозов. Очаги выраженной лейкоцитарной инфильтрации с включениями относительно рыхлого фибрина на фоне очагово-диффузных диапедезно-деструктивных кровоизлияний расположены в эпикарде и субэпикардиальной жировой ткани. Здесь же расположены колонии грибковой микрофлоры, относящейся к гиалогифомикозам: хорошо окрашены гематоксилином-эозином, гифы в диаметре около 2-3 мкм, разрастаются пучками от центрального фокуса в виде «кустарника». Некоторые гифы дихотомично делятся. Мицелий септированный. Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250. |
|||||
Рис. 9, 10. Метастазы плоскоклеточного рака в миокард, субэпикардиальную жировую ткань. Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250. |
|||||
Рис. 11. Актиномикоз лёгкого с перифокальной картиной очаговой острой гнойной пневмонии. Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х100. |
Рис. 12. Лёгочная миграция личинки аскариды. В просвете альвеолы червеобразная структура розового цвета, свёрнутая в клубок, с признаками её движения (тонкие перифокальные полоски просветления в реактивном гнойном экссудате). Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250. |
||||
|
|
||||
|
|
||||
Рис. 13-15. Грибковая (кандидозная) пневмония. Лёгочная ткань разрушена за счёт выраженного разрастания древовидного мицелия с перифокальной острой гнойно-фибринозной пневмонией. В отдельных полях зрения видны спорангии со спорами. Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250. Препараты предоставлены кафедрой судебной медицины Ижевской ГМА, Свердловским ОБСМЭ. |
|||||
|
|
||||
Рис. 16, 17. Грибковая (кандидозная) пневмония. Лёгочная ткань разрушена за счёт выраженного разрастания мицелия с большим количеством спороносцев. Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х100 и х250. |
|||||
Рис. 18. Криптококкоз лёгкого. Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х100. |
Рис. 19. Криптококкоз печени. Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250. |
||||
Рис. 20, 21. Печень. Очаговое острое гнойное межуточное воспаление с преобладанием эозинофилов. Очаговое выраженное полнокровие синусоидных капилляров и центральных вен с эритростазами, диапедезными микрогеморрагиями. Гепатоциты в состоянии выраженной белковой зернистой дистрофии, мелко — и крупнокапельной жировой дистрофии. Часть печёночных клеток в состоянии некробиоза-некроза. Окраска: гематоксилин-эозин. Увеличение х250. |
|||||
Рис. 22. Выраженная очаговая гидропическая дистрофия гепатоцитов, сочетающаяся с мелко — и крупнокапельной жировой дистрофией печёночных клеток. Окраска: гематоксилин-эозин. Увеличение х250. |
Рис. 23. Гигантоклеточный гепатит. Неравномерное полнокровие синусоидных капилляров. Белковая зернистая дистрофия, признаки неравномерно выраженной их регенерации в виде деления ядер и самих клеток. Диффузно в срезах в большом количестве расположены гигантские многоядерные макрофаги. Окраска: гематоксилин-эозин. Увеличение х250. Препараты предоставлены кафедрой судебной медицины Ижевской ГМА |
||||
Рис. 24, 25. Выраженный очагово-диффузный гемосидероз ткани печени. Большое количество клеток Купфера с цитоплазмой, нагруженной большим количеством буро-коричневого пигмента. Окраска: гематоксилин-эозин. Увеличение х250. |
|||||
Рис. 26-29. Почка с резко выраженной белковой зернистой дистрофией, гидропической (вплоть до баллонной) дистрофией эпителия канальцев, с некробиозом-некрозом отдельных эпителиоцитов и групп клеток различной величины, атрофией ряда канальцев различной степени выраженности. Наличие в просветах части канальцев свежих ярко-красных эритроцитов (гематурия) и выщелоченных эритроцитов, гиалиновых цилиндров, слущенных эпителиоцитов. Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250. |
|||||
Рис. 30, 31. Выраженный очагово-диффузный гемосидероз селезёнки. Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250. |
|||||
Рис. 32, 33. Светлоклеточный рак почки. Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250. Препарат представлен экспертом Ким С.В.. |